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       FluorCam-Pro植物多光譜熒光成像系統(tǒng)是FluorCam葉綠素熒光成像技術(shù)的最新高級擴展產(chǎn)品。此系統(tǒng)既可用于PAM脈沖調(diào)制式葉綠素熒光動態(tài)成像分析，又可用于UV紫外光對植物葉片激發(fā)產(chǎn)生的多光譜熒光成像測量分析，還可選配濾波器組對GFP、RFP、YFP、SYBR Green等熒光蛋白和熒光染料進行穩(wěn)態(tài)熒光成像測量。測量對象包括葉片、果實、花朵、整株擬南芥或其他小型植株、苔蘚、微藻、大型藻類乃至特定的動物樣品。

應用領(lǐng)域：

§   植物光合生理生態(tài)

§   植物逆境脅迫生理與易感性

§   植物初級代謝與次級代謝

§   植物表型組學成像分析（Phenotyping）

§   作物遺傳育種與抗性篩選

§   種子萌發(fā)與活力監(jiān)測

§   轉(zhuǎn)基因植株篩選

功能特點：

§   多激發(fā)光-多光譜熒光成像技術(shù)：通過兩種以上不同波長的光源激發(fā)植物樣品中不同的發(fā)色團發(fā)出熒光并進行成像檢測，即為多激發(fā)光多光譜熒光成像技術(shù)。植物的多光譜熒光主要包括葉綠素熒光、UV紫外光激發(fā)多光譜熒光和熒光蛋白熒光

§   FluorCam-Pro無需更換任何配件即可同步實現(xiàn)多激發(fā)光-多光譜熒光成像功能：

s  PAM脈沖調(diào)制式葉綠素熒光成像

s  紫外激發(fā)F440、F520、F690、F740多光譜熒光成像

s  GFP、RFP、YFP等常用熒光蛋白成像

§   可根據(jù)用戶需要定制熒光蛋白或熒光染料成像，如BFP、CFP、SYBR Green、DAPI等

§   可對黃酮、花青素含量進行定量測量

§   可進行自動重復成像測量和無人值守監(jiān)測，可設置實驗程序（Protocols）自動循環(huán)成像測量，成像測量數(shù)據(jù)自動按時間日期存入計算機（帶時間戳）

§   測量樣品為各種活體植物樣品，包括葉片、花卉、果實、整株擬南芥或其他小型植物、微藻（包括液滴、多孔板、固體培養(yǎng)基）及大型藻類等

RFP熒光蛋白熒光：通過RFP熒光標記確定轉(zhuǎn)基因表達位置，并對表達量進行定量分析（以上成像圖均由易科泰EcoTech?實驗室提供）

技術(shù)指標：

§   一體式設計，自帶暗適應箱體

§   最佳成像面積：20×20cm

§   測量參數(shù)：Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv'/ Fm', Fv/ Fm ,Fv',Ft,ΦPSII, NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qL, QY, QY_Ln, Rfd, ETR等50多個葉綠素熒光參數(shù)；紫外激發(fā)多光譜熒光成像參數(shù)：F440、F520、F690、F740；熒光蛋白熒光強度參數(shù)Ft；每項參數(shù)均可顯示對應二維熒光彩色圖像。并可測量計算黃酮醇指數(shù)Flavonol Index,、花青素指數(shù)Anthocyanin Index。

·        具備完備的自動測量程序（protocol），可自由對自動測量程序進行編輯

1)       Fv/Fm：測量參數(shù)包括Fo，Fm，Fv，QY等葉綠素熒光參數(shù)

2)       Kautsky誘導效應：Fo，Fp，Fv，Ft_Lss，QY，Rfd等葉綠素熒光參數(shù)

3)       Quenching熒光淬滅分析：Fo，Fm，Fp，Fs，Fv，QY，ΦII，NPQ，Qp，Rfd，qL等50多個葉綠素熒光參數(shù)

4)       Light Curve光響應曲線：不同光強梯度條件下Fo，Fm，QY，QY_Ln，ETR等葉綠素熒光參數(shù)

5)       MultiColor紫外激發(fā)多光譜熒光成像（選配）

6)       FPs熒光蛋白成像：GFP、YFP、RFP、BFP等（選配）

§   熒光激發(fā)光源組：全LED光源，包括620nm紅光、5700K冷白光、735nm遠紅光、365nm紫外光，445nm品藍光，470nm藍光，505nm青光，530nm綠光，590nm琥珀色光等

§   高分辨率CCD相機

1)       圖像分辨率：1360×1024像素

2)       時間分辨率：在最高圖像分辨率下可達每秒20幀

§   具備7位濾波輪，標配葉綠素熒光濾波器，根據(jù)用戶需要可定制紫外激發(fā)多光譜熒光和GFP、RFP、YFP、BFP等熒光蛋白專用濾波器

§   FluorCam葉綠素熒光成像分析軟件功能：具Live（實況測試）、Protocols（實驗程序選擇定制）、Pre–processing（成像預處理）、Result（成像分析結(jié)果）等功能菜單

§   自動測量分析功能：可設置一個實驗程序（Protocol）自動無人值守循環(huán)成像測量，重復次數(shù)及間隔時間客戶自定義，成像測量數(shù)據(jù)自動按時間日期存入計算機（帶時間戳）

§   成像預處理：程序軟件可自動識別多個植物樣品或多個區(qū)域，也可手動選擇區(qū)域（Region of interest，ROI）。手動選區(qū)的形狀可以是方形、圓形、任意多邊形或扇形。軟件可自動測量分析每個樣品和選定區(qū)域的熒光動力學曲線及相應參數(shù)，樣品或區(qū)域數(shù)量不受限制（>1000）

§   輸出結(jié)果：高時間解析度熒光動態(tài)圖、熒光動態(tài)變化視頻、熒光參數(shù)Excel文件、直方圖、不同參數(shù)成像圖、不同ROI的熒光參數(shù)列表等

應用案例：

1.      抗病毒基因研究：葉綠素熒光成像與GFP成像聯(lián)合分析

法國國家農(nóng)業(yè)科學研究院一直致力于馬鈴薯y病毒組的抗病基因研究，通過不同基因編輯處理方法，驗證抗病毒分子機制。相關(guān)研究中，研究人員利用FluorCam多光譜熒光成像系統(tǒng)的GFP熒光蛋白成像功能，定量分析感染面積與病毒積累量，從而直觀地反映了不同基因功能對擬南芥病毒抗性的影響。同時，葉綠素熒光成像則反映病毒對光合系統(tǒng)的損傷，同步提供植物的光合表型信息。

參考文獻：

§   Zafirov D, et al. 2021. When a knockout is an Achilles' heel: Resistance to one potyvirus species triggers hypersusceptibility to another one in Arabidopsis thaliana. Mol Plant Pathol. 22: 334–347

§   Bastet A, et al. 2019. Mimicking natural polymorphism in eIF4E by CRISPR‐Cas9 base editing is associated with resistance to potyviruses. Plant Biotechnology Journal 17: 1736–1750

§   Bastet A, et al. 2018. Trans-species synthetic gene design allows resistance pyramiding and broad-spectrum engineering of virus resistance in plants. Plant Biotechnology Journal: 1–13

2.      不同顏色凌霄葉片的葉綠素熒光與紫外激發(fā)多光譜熒光成像分析（易科泰EcoTech?實驗室）

RGB彩色成像                         最大光化學效率Fv/Fm

非光化學淬滅系數(shù)NPQ            次生代謝物熒光F520（多酚、黃酮等）

產(chǎn)地：歐洲